二手液相色谱柱作为液相色谱仪中不可或缺的核心材料,其质量直接决定了数据的准确性。
1. 硅胶基质:高纯度、低成本、高强度和易于化学修饰是硅胶基质的显著优势,但其使用的pH范围受到限制。通常情况下,大多数硅胶基质填料在pH2-8之间具有稳定性,不过经过特殊修饰的硅胶键合相可在更广泛的pH1.5-10范围内保持稳定。
2. 孔容和机械强度:孔容,即“孔体积”,指的是单位颗粒的空隙体积大小,代表填料的机械强度。孔容较大的填料相对于孔容较小的填料具有略微较弱的机械强度。通常,孔容小于1.5mL/g的填料主要用于HPLC分离,而孔容大于1.5mL/g的填料则常用于尺寸排阻色谱和低压色谱。
3. 孔径和比表面积:HPLC吸附介质为多孔颗粒,其中大部分的反应表面位于孔内。由此可见,分子必须进入孔内才能被有效吸附和分离。孔径和比表面积是相辅相成的两个概念,孔径小则比表面积大,反之亦然。较大的比表面积有助于提高样品与键合相的反应,增加样品保存时间、上样量以及复杂成分的分离度;而较小的比表面积则适合快速梯度分析,平衡时间更短。
4. 安捷伦液相色谱柱的含碳量:含碳量指硅胶表面键合相中碳的比例,直接影响柱容量、分辨率和分析时间。高含碳量适用于要求高分离度的复杂样品,而低含碳量则适用于快速分析简单样品或需要高含水活动相条件的样品。一般而言,C18填料的含碳量在0.07-0.19之间。
5. 颗粒外形:尽管大部分现代HPLC填料为球形颗粒,但也存在不规则颗粒的情况。球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性,以及相对较长的柱寿命,尤其适合在使用高粘度活动相时。不规则颗粒则具有更大的比表面积和相对较低的价格。
6. 颗粒粒径:颗粒粒径越小,柱效和分离度越高,但也会产生较高的柱压降。选择1.5-3μm的填料可解决复杂样品的分析需求,1.5μm的填料可用于高要求的分析,而10μm或更大粒径的填料适用于半制备或制备柱的使用。