二手液相色谱仪校准流程及关键步骤解析

二手液相色谱仪概述

二手液相色谱仪作为一种高效的分析仪器，主要由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统及数据处理系统等核心部分组成。其工作原理基于样品中各组分在色谱柱中的固定相与流动相间因分布或吸附特性差异而实现分离。分离后的组分由检测器进行检测，并由数据处理系统记录成色谱图，用于各组分的定性和定量分析。

二手液相色谱仪校准流程

环境条件准备

校准过程中，需确保室温保持在（15～30）℃，且温度变化不超过3℃（对于差示折射率检测器，室温变化不超过2℃）。室内相对湿度应控制在（20～85）%之间。此外，校准环境应远离易燃、易爆、强腐蚀性物品，无机械振动和电磁干扰，并保持通风良好。

标准物质选用

选用以下标准物质进行校准：

萘-甲醇溶液标准物质：定值为1.00×10^-4 g/mL，扩展不确定度小于4%，K=2。

高灵敏度萘-甲醇溶液标准物质：检定值为1.00×10^-7 g/mL，扩展不确定度小于4%，K=2。

胆固醇甲醇溶液标准物质：标准值为200 μg/mL，扩展不确定度小于2.0%，K=2。

低浓度胆固醇甲醇溶液标准品：标准值为5.0 μg/mL，扩展不确定度小于5.0%，K=2。

胆固醇纯度标准品：标准值为99.7%，扩展不确定度小于0.1%，K=2。

输液系统校准

泵的耐压性：连接仪器各部分，以甲醇或纯水为流动相，设定流速为0.2 mL/min。启动仪器并保持压力稳定10分钟，检查各管道接口处是否有泄漏。随后取下色谱柱，堵塞泵出口端，使压力达到最大允许值的90%，保持5分钟，确认无泄漏。

泵流量设定误差及稳定性：按要求设定流速，待压力稳定后，用清洁容量瓶收集流动相，并称重计算所测流速，重复校准3次。

梯度误差：设置梯度洗脱程序，用A溶剂（纯水）和B溶剂（含0.1%丙酮的水溶液）进行梯度变化曲线绘制，计算B溶剂变化引起的响应信号值变化，重复校准两次。

柱箱温度设定点误差及稳定性校准

将数字温度计探头置于色谱柱恒温器中与色谱柱相同位置，选择设定温度（如35℃和45℃）进行校准。升温后，每10分钟记录一次温度计读数，共记录7次，计算平均值及稳定性。

探测器标定

以紫外可见光探测器和二极管阵列探测器为例，进行探测器标定。

定性和定量重复性校准

连接仪器各部分，选用C18色谱柱，以甲醇为流动相，设定流量为1.0 mL/min。根据检测器类型选择测量参数（如波长设定为254 nm），待基线稳定后注入一定体积的萘-甲醇溶液标准物质，连续测定6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，计算相对标准差。

二手液相色谱仪的校准流程涉及环境条件准备、标准物质选用、输液系统校准、柱箱温度设定点误差及稳定性校准、探测器标定以及定性和定量重复性校准等多个环节。通过严格的校准流程，可以确保液相色谱仪的准确性和稳定性，提高分析结果的可靠性。