二手高效液相色谱仪操作与维护的专业建议

二手高效液相色谱仪（HPLC）作为实验室中的核心分析设备，其操作规范与维护保养对于确保实验结果的准确性和仪器的长期稳定运行至关重要。以下是一些关于HPLC使用的专业建议，旨在帮助实验人员较好地管理和维护这一精密仪器。

1. 流动相的选择与处理

建议：使用HPLC级的试剂作为流动相，并通过0.2μm的混合滤膜（水流动相）或有机滤膜（有机流动相）进行过滤，以去除杂质。过滤后，需对流动相进行超声脱气15-20分钟，并恢复至室温后再使用。此举旨在防止杂质堵塞色谱柱，同时避免气体进入色谱柱，损害其效能。

2. 避免纯水冲洗色谱柱

建议：在冲洗反相HPLC色谱柱时，应避免使用纯水作为流动相，因为纯水的高极性可能损害非极性的C18色谱柱，导致柱效下降。

3. 谨慎选择有机溶剂

建议：避免纯乙腈作为流动相，以防止单向阀粘住，导致泵不进液。应选择合适的有机溶剂比例，以确保仪器的正常运行。

4. 缓冲溶液的使用与清洗

建议：使用缓冲溶液后，应立即用去离子水冲洗管路及柱子1小时，再用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗40分钟以上，以充分去除离子。同时，对柱塞杆外部也需进行清洗。长时间不使用时，应避免用纯水保存柱子，而应选择有机相（如甲醇）进行保存，并取下柱子用堵头封好。

5. 仪器启动与排气

建议：在开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，以避免柱压瞬间升高超过压力上限，导致泵停止工作。

6. 样品限制与清洗

建议：C18柱应避免进入蛋白样品、血样及生物样品。若发生堵塞导致压力太大，应按预柱、混合器中的过滤器、管路过滤器、单向阀的顺序进行检查并清洗。清洗方法包括使用异丙醇冲洗、超声波清洗及10%稀硝酸清洗等。

7. 避免气泡产生

建议：气泡会导致压力不稳，重现性差。因此，在使用过程中应尽量避免产生气泡。若进液管内不进液体，可使用注射器吸液进行排查。

8. 注意柱子pH值范围

建议：注意柱子的pH值范围，避免注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

9. 流动相更换与清洗

建议：更换流动相时，应先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时，需用异丙醇进行过渡。每次由有机相变流动相或流动相变有机相时，均需用蒸馏水清洗。

10. 储液瓶的清洗与更换

建议：经常清洗流动相储液瓶，或每做一批新样品更换一次流动相。脏污的储液瓶会污染注入的流动相。建议储液瓶中缓冲液使用时间不超过一周，有机溶剂使用时间不超过一个月。同时，应定期更换和清洗储水瓶中的水，以保持其清洁度。

11. 泵的冲洗与维护

建议：无论使用长短，在停泵以前一定要用非缓冲液流动相冲洗泵半小时以上。若流动相中含有难挥发的缓冲液（如磷酸盐），则冲洗时间应更长。此举旨在防止难挥发物在活塞密封垫表面形成固形物沉淀，从而磨损密封垫并导致单向阀渗漏。

12. 自动进样器的清洗与维护

建议：定期更换和补充自动进样器的冲洗液。同时，根据溶剂的有效期和规定，清洗储液瓶或更换洗涤液。在条件允许的情况下，每次分析完后可设置进1-2针纯溶剂（如甲醇、乙腈）进行清洗。

13. 色谱柱的清洗与维护

建议：色谱柱的污染随使用时间的增加而增加。因此，在每批样品分析结束后或准备卸下柱子时，应用大量的流动相冲洗柱子。使用梯度冲洗效果更佳，具体比例需根据柱子的说明书和性质而定。

通过遵循以上专业建议，实验人员可以较好地管理和维护高效液相色谱仪，确保其长期稳定运行并提供准确的实验结果。